avacta重組抗體專家，avacta使命是通過發(fā)展我們的一種*Affimer安全和有效的藥物來塑造醫(yī)學的未來®平臺，并提供了強大的Affimer ®用于研究和診斷試劑

重組抗體表達是利用基因重組技術,將抗體序列轉入表達載體并在表達系統(tǒng)中表達,終純化得到重組抗體.相較于傳統(tǒng)的抗體制備方法,利用基因重組技術表達抗體具有諸多優(yōu)勢

周期短:重組抗體生產周期為6~8周,而傳統(tǒng)制備方法需4~6個月;

可控性高:抗體的基因是確定的,因此實驗的重復性好且批次間差導小;

免疫原性低:不需要免疫動物,抗體不會產生鼠源性,不容易激起人體的免疫反應;

基因工程改造:利用基因重組技術,可以實現(xiàn)抗體片段的生產以及鼠源單抗的人源化改造。

 Anti-Human SUMO1 Affimer Reagent (HS1-A1) Biotinylated

抗人SUMO1 Affimer試劑（HS1-A1）生物素化

目錄代碼AVA00024-

規(guī)格100μg

Affimer ® （HS1-A1）到人力SUMO1生物素化

一般  

名稱 抗人SUMO1 Affimer試劑（HS1-A1）生物素化

目錄代碼 AVA00024生物素

概觀  

克隆ID HS1-A1

尺寸（μg） 100

經測試的應用程序 共免疫沉淀，ITC，Western Blotting

標簽 C-term 6His

共軛 生物素化

屬性  

形成 液體

存儲說明 短期使用，儲存在4°C。我們建議在-20°C下長期等分和儲存。Affimers通常不受3-4次冷凍/解凍循環(huán)的影響

緩沖 100mM磷酸鈉，75mM氯化鈉，0.02％Sodium Azide，pH7.4

純度 > 95％

凈化方法 IMAC隨后進行脫鹽

克隆 單克隆

目標  

目標 人類SUMO1

物種反應性 人的

目標Uniprot ID P63165

目標功能

泛素樣蛋白質，可以作為單體或賴氨酸連接的聚合物共價附著在蛋白質上。通過異肽鍵與其底物的共價連接需要E1復合物SAE1-SAE2的預先活化和與E2酶UBE2I的連接，并且可以通過E3連接酶如PIAS1-4，RANBP2或CBX4促進。這種對蛋白質賴氨酸殘基的翻譯后修飾在許多細胞過程中起著至關重要的作用，例如核轉運，DNA復制和修復，有絲分裂和信號轉導。例如，涉及將RANGAP1靶向核孔復合蛋白RANBP2。聚合SUMO1鏈也易受多泛素化的影響，其作為蛋白酶體降解修飾蛋白的信號。也可能調節(jié)參與腭發(fā)育的基因網絡。

Affimers的設計在許多方面比抗體表現(xiàn)更好。

研究領域 Cell Signaling，UPS

此Affimer僅在下面詳述的應用程序中進行了測試。應用說明包括推薦的起始濃度，但是，宜條件應由終用戶確定。

等溫滴定量熱法

克隆HS1-A1顯示出對人SUMO1特異性（K d = 97nM），但通過等溫滴定量熱法與人SUMO2沒有相互作用。

免疫共沉淀

用攜帶靶標（GFP，GFP-SUMO1或GFP-SUMO2）和Affimer（具有FLAG標簽）的質粒（共）轉染HEK293T細胞48小時。將細胞在PBS中洗滌，并將蛋白質在含有50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1％NP-40和1x蛋白酶抑制劑混合物（Roche）的1ml裂解緩沖液中在冰上提取15分鐘，并通過在12,000℃離心澄清。 xg 10分鐘，4°C。將裂解物與GFP-Trap（Chromotek）一起溫育，用于GFP標記物質的共免疫沉淀。免疫沉淀的蛋白質在Laemmli緩沖液中洗脫并進行免疫印跡分析。如標記但紅色框，Affimer（HS1-A1）在GFP-SUMO1存在下共沉淀，但不存在GFP-SUMO2。

Western Blotting

SDS-PAGE和印跡

在Bolt 4-12％Bis-Tris Plus凝膠（Life Tech）上分離蛋白質樣品（每孔100ng），并使用iBlot2（Life Tech）印跡到硝酸纖維素上。

閉塞

使用1x TBS + 3％脫脂奶粉（1小時，RT°C，400rpm）封閉膜

洗1

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

Affimer孵化

1 x TBS + 3％脫脂奶粉中5μg/ ml（16 h，4°C，400 rpm）

洗2

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

發(fā)現(xiàn)

兔抗6xHis HRP結合物，在1 x TBS + 3％脫脂奶粉中1 / 5,000稀釋（1小時，RT°C，400 rpm）

洗3

3 x 5ml的1xTBS-T（0.05％吐溫-20）

基質

ECL（Amersham）

只有當Affimer存在時才會形成可檢測的復合物：Affimer識別免疫球蛋白，并且通過Affimer上的6xHis標簽介導復合物的檢測。抗-6xHis結合劑不檢測不存在Affimer的膜4上的IgG。

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