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biodatacorp UPTT試劑 說明書

發布時間:2018/4/19      點擊次數:2362

UPTT™ 未激活的部分凝血活酶時間檢測使用說明書

 

貨號:105997

品名:UPTT™ Reagent (3mL)

 

產品描述:

UPTT是標準化凍干兔腦腦磷脂(部分凝血活酶),磷脂濃度≤0.1%可代替血小板提供凝血催化表面,是進行活化部分凝血酶時間測試的理想試劑。該試劑符合包括ASTM F2382-01,04,12,FDA藍皮書備忘錄E95-1和ISO 10993-4中規定的血液相容性評估要求。

 

用途:

生物相容性或對生命的影響是醫療或血管設施是否適合于體內使用的關鍵衡量指標,UPTT檢測試劑用于體外測定未激活的部分凝血活酶時間,通過測量關鍵凝血酶活性來特異性評估醫用設備和材料對血液或血液相容性的影響。

 

檢測原理:

在缺乏鈣離子的情況下,全血暴露在外源物質時發生接觸激活[1,2,3]。UPTT通過檢測凝血時間來測量參與內源性血漿促凝血酶原生成的血漿因子[4,5]。該檢測應重復三次,將檢測結果與非處理血漿和陰性對照進行比較。

 

 

產品優點:

UPTT試劑已經過手動和光學檢測系統的測試,具有可靠的精度和靈敏度,可為基于接觸活化的血液相容性和血栓形成試驗提供可靠的結果[1.3,6,7]

 

試劑盒包含:

20 x 3.0mL的UPTT試劑,

含約~0.1%兔腦腦磷脂,緩沖液和穩定劑。

 

試劑儲存

凍干的UPTT試劑在2-8°C儲存直至有效期在原容器懸的UPTT試劑可于2-8°C密閉儲存7天。

注意事項

1試劑不用于人體或動物診斷測試。

2在整個試劑準備,樣本收集,樣本制備和分析過程中須嚴格遵守標準預防措施

3根據實驗室管理制度處理銳器如針頭等和生物廢物。

 

 

額外所需材料(本試劑盒未提供):

1.純化水,pH 5.3 - 7.2(蒸餾水,去離子水或試劑級)

2.移液器(10ml, 3ml和0.1mL)。

3.氯化鈣,0.025M(C / N 100989)

4.檸檬酸鈉,0.11M(C / N 100994)

5.凝血參照血漿

 

檢測準備

試劑配制:

在試劑配制前將UPTT小瓶置于室溫。

1.輕輕敲擊小瓶使附著在塞子上的試劑掉于瓶底;

2.取下鋁質密封圈

3.取出塞子,用3.0 mL純凈溶解小瓶內容物。

4.蓋上塞子并翻轉小瓶以*混合內容物。在使用前至少要保持15分鐘以確保內容物*溶解

注意:試劑一旦配置完成,在2 - 8°C儲存在密封的原始容器中可穩定7天。

 

測試血漿的采集:

UPTT檢測樣本必須是由抗凝血全血制備的無血小板或貧血小板血漿[8-10]

樣本采集

采血時應小心謹慎血液在收集中可見時立即釋放止血帶避免停滯,溶血,組織液污染或暴露于玻璃表面

建議使用[10]

1.采用實驗室的蝶翼式采血管套
2.將血液抽入含有0.11M檸檬酸鈉抗凝血劑的真空塑料標本收集管

3. 輕輕顛倒試管4-5次混勻樣本。

注意:確認使用的抗凝劑類型和濃度彩色標本管頭不能*顯示檸檬酸鹽濃度。

 

注射器采血可選[11]

1.采用實驗室的蝶翼式采血管套

2.抽取9.0mL血液入塑料注射器中避免吸力過大。

3.取下針頭,立即輕輕地將血液加入到含有1.0mL 0.11M檸檬酸鈉(血液抗凝血劑為9:1)的聚丙烯管中,

4..蓋上試管并輕輕顛倒4-5次混合

5.在測試前在室溫下樣品zui多保持2小時。

 

 

血小板血漿制備(以下兩種方法均可)

(一)PDQ®血小板功能離心機

1.將樣品放入PDQ

2.選擇PFP設置

3.按開始鍵。

 

(二)臺式離心機制備貧血小板血漿[10,12-14]

1.將樣品放入離心機中

2.在2500×g離心15分鐘。

收獲樣品

1.使用塑料移液器

2.小心地吸取貧血小板血漿,小心接觸白細胞層(白膜層)

3.將樣品轉移到塑料管并蓋上蓋子

4.樣品在測試前可以在15 - 28°C下保存zui多兩個小時

 

 

注意事項:

(1)廢棄管的收集應符合實驗室管理制度

(2)當紅細胞壓積<30%或> 55%時需根據樣本的血細胞比容調整標本體積使血液抗凝劑9比1[4,10,15]

(3)在手術過程中,不要將全血樣本或測試樣本暴露在玻璃表面[12,14]

(4)不要對明顯溶血,黃疸或脂血癥的樣品進行UPTT測試。[10]

注意:為獲得*檢測結果溶解的UPTT試劑的應在使用前一刻通過磁力攪拌或輕輕顛倒混勻,或使用塑料涂層的一次性攪拌棒攪拌

 

 

 

檢測步驟

部分凝血活酶時間終點可通過凝血分析儀和手動凝血方法檢測。

凝血分析儀檢測法

凝血分析儀測試方法與用于激活的部分凝血活酶時間測試(aPTT)的方法相同,按照儀器說明進行檢測即可。注意必須采用實驗室測試的UPTT參考范圍[16],所有測試應重復進行三次。 間接血液接觸的檢測設備需要1克樣品,直接血液接觸的檢測設備需要2.5克樣品。 必須控制檢測中設備與測試樣品接觸的時間。

 

手動檢測

注意:此測試程序適用于手動方法,如使用自動或半自動分析儀,請按照分析儀操作手冊中的說明進行操作。

1.將0.1mL測試或對照血漿移入測試比色杯中,并在37℃下孵育血漿2分鐘

2.在37℃下預孵育0.025M氯化鈣

3.將0.1mL UPTT試劑移入含有血漿的測試容器中。

4.在37°C孵育血漿/試劑混合物2到5分鐘或根據具體實驗方案確定

5.加入0.1mL預孵育的氯化鈣,同時啟動計時器。

6.記錄凝血時間

所有測試應重復進行三次。 間接血液接觸的檢測設備需要1.0克樣品,直接血液接觸的檢測設備需要2.5克樣品。 必須控制檢測中設備與測試樣品接觸的時間。

 

檢測結果

 

UPTT測試凝血終點的結果應以秒為單位。測試和參照均應重復測試三次,結果取平均值,然后與實驗室已建立的參考范圍進行比較。[12,14,15,17]

測試結果中應包括表示測試有效性的p值,比較未暴露血漿的平均結果與暴露于檢測裝置的血漿的結果,要通過測試,設備統計的p值必須≥0.05。

預期結果,正常血漿和對照1,2和3的CV應小于5%。

正常血漿: >60

Level 1: >60

Level 2: > 90

Level 3: >120

注意:使用UPTT在光電光分析儀上用正常對照血漿進行測試時,結果將大于60秒,接觸激活會縮短這一時間。由于檢測方法和分析儀/人員之間的操作的差異,每個實驗室必須為UPTT檢測建立參考范圍。實驗方案,樣品制備和終點確定方法均可能會影響測試結果。

 

影響因素:

UPTT測試結果的度和準確性可能受到許多因素的影響。實驗方案和實驗室間的差異來自用于測量凝固終點的凝血系統的數量.5,15在同一實驗室中影響測試結果的因素包括用于溶解試劑的純凈水的pH值,移液技術,孵育時間和溫度的把握,試劑污染或試劑批號的變化等[18,19]。定期進行質量控制測試有助于確定和排除影響測試結果的因素。

 

 

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