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Glycotech 平行板流室操作說明書

發布時間:2018/4/3      點擊次數:1721

世界*實驗材料供應商 GlycoTech正式授權上海起發為其中國代理, GlycoTech在一直是行業的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產品和服務,上海起發一直秉承為中國科研客戶帶來的產品,的服務,簽約 GlycoTech就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產品和服務,您的滿意將是我們zui大的收獲

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GlycoTech始建于1991年,是美國國內的專注于糖復合物生物功能和醫療應用研究的生物公司。該公司建立有自己的研究項目,并開發了大量知識產權組合。另外,利用多年來發展的產品業務,GlycoTech建立了zui大的稀有糖類試劑和相關技術的數據庫之一。

GlycoTech在過去的六年中一直與諾華制藥公司(Novartis)維持著企業合作關系,目的在于共同開發一類可作為強效拮抗劑的糖配體小分子模擬物,這些模擬物能抑制移植誘導的再灌注損傷中發生的血液淋巴細胞的異常外滲現象。近期與Chiron公司簽訂了許可協議,允許其范圍銷售Glycotech專有的以抗糖類腫瘤標記物為基礎的癌癥診斷方面的產品。不僅如此,與國家衛生研究院,賓夕法尼亞大學,羅徹斯特大學和芝加哥神經外科和神經學科研研究院的合作項目也逐一得到開展。

GlycoTech正積極尋找其他的制藥合作公司,可著重提供糖生物領域的一系列專業技術。GlycoTech公司的結構和發展策略都非常適合合作者快速得到*的專業知識,并且可以避免承擔因公司內部發展引發固有財政責任的相關義務。

 

 

 

平行板流動室中的動態流動分析

流動檢測可以在明確的壁面切應力下觀察細胞粘附。細胞粘附的不同事件的可視化可以通過選擇性圖像采集和隨后的圖像處理來量化。流動測定法特別適合于研究粘附事件,該事件在比大多數靜態粘附測定法更短的時間范圍內發生得非常快。另外,可以研究初始事件之后的事件,例如細胞穩定和擴散,從而給出特定細胞 - 細胞或細胞 - 基底粘合劑行為的動力學的一些洞察。

 材料:

顯微鏡:

 

倒相顯微鏡配置為相襯和熒光操作

物鏡(6.3 x,10 x,40 x)

階段孵化器

生物:

 

細胞懸液(嗜中性粒細胞,癌細胞)

在35mm培養皿中的細胞單層或涂覆的基質

粘附介質(含有12mM Hepes的無血清培養基)

纖連蛋白(人血漿)

牛血清白蛋白(BSA)

流室系統:

 

帶密封墊和管件的流量室甲板

35毫米組織培養皿

哈佛注射泵

適用于泵的玻璃注射器(3,5,20或60 cc)

硅橡膠管

旋塞

真空泵

電腦/電子:

 

數字圖像采集和處理系統

顯示器

錄像機

帶控制器的CCD相機

時間日期發生器

計算機與圖像系統的接口

存儲設備的圖像

 

操作過程:

一、細胞單層制備

1.通過向每個培養皿中加入1ml5.5μg/ ml FN溶液來涂覆人纖連蛋白(FN)培養皿。

2.孵育30分鐘。在室溫下。

3.從每道菜中吸出溶液。

4. 根據達到匯合所需的時間,以0.5-3.0×10 5個細胞/ ml的接種密度向每個培養皿中加入2ml細胞懸浮液(Huvecs,CHO細胞)。

5. 1-5天后,在流動測定中使用具有融合單層的培養皿。飼養細胞每2-3天,但通常不48小時。的流量測定。

二、涂層基板制備

1.用標記筆在每個盤的中心劃出用于涂布基材的涂布區域(5mm直徑)。

2.加入20μl含10μg/ ml濃度底物的溶液至涂層區域。孵育1小時。

3.吸出液體,加入20μl1%BSA封閉1小時。

4.吸走BSA,加入20μl抑制劑1小時。

5.菜肴已準備好用于流動測定。

三、使用平行板流動室的流動分析

1.打開階段培養箱和溫熱粘合介質至37°C 1小時。在開始流動測定之前。

2.將進口,出口和真空管路連接到流動室甲板上的流動系統裝置。用介質填充系統并去除系統中的所有空氣。

3.用細胞懸液填充入口儲液器。對于使用細胞單層的測定,推薦10 6個 細胞/ ml。對于涂布的底物測定,使用10 5個細胞/ ml。

4.通過倒轉甲板將碟子安裝到流動室甲板上,在流道區域放置一小塊培養基,然后將35毫米培養皿放在甲板上。真空將在甲板上舉行。確保碟子在流路中沒有氣泡。

5.將組裝好的腔室放在顯微鏡臺上。

6.啟動細胞的流式細胞注射器連接在0.1-4.0達因/厘米的范圍內的剪切應力至出口流動室泵2。

7.讓細胞流動足夠的時間以獲得足夠數量的細胞與細胞單層或涂布的表面相互作用。一般3-10分鐘。用來。

8.開始圖像采集。在盤子上7-10個位置收集圖像。通常,在給定實驗條件下的3個盤子提供足夠的數據以顯示處理之間的統計差異。

9.在所有盤上獲取圖像后,執行圖像分析以量化流動測定。

 

 

 

 

貨號

品名

規格

目錄價

品牌

31-001

Circular Flow Chamber Kit

1 kit

10,800

Glycotech

 

 

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