一、產品概述

iCE Electrolyte Kit（貨號：102506）是由Bio-Techne旗下ProteinSimple品牌推出的一款專門用于毛細管等電聚焦電泳分析的電解液試劑盒。該試劑盒包含兩個100毫升的預裝電解液瓶，分別用于填充毛細管卡盒兩端的陽極電解液槽和陰極電解液槽，是全柱成像毛細管等電聚焦（icIEF）分析的配套試劑。

該產品自推出以來，已在生物制藥、生命科學研究、疫苗開發(fā)、基因治療等多個領域得到廣泛應用。無論是早期的蛋白藥物研發(fā)階段，還是后期的中試放大、工藝優(yōu)化、穩(wěn)定性研究以及最終的GMP質量控制和批次放行環(huán)節(jié)，iCE Electrolyte Kit都為實驗室提供了穩(wěn)定可靠的電解液解決方案。

二、產品詳細描述

2.1 基本信息

• 英文名稱：iCE Electrolyte Kit

• 中文名稱：iCE等電聚焦分析電解液試劑盒

• 品牌歸屬：Bio-Techne（納斯達克代碼：TECH）——美國納斯達克上市公司，旗下?lián)碛蠵roteinSimple、R&D Systems、Novus Biologicals、Tocris等多個生命科學品牌

• 子品牌：ProteinSimple——Bio-Techne集團旗下的蛋白質分析品牌，專注于創(chuàng)新性蛋白質分析工具的研發(fā)與生產

• 貨號：102506

• 包裝規(guī)格：2瓶裝，每瓶100毫升，共計200毫升

• 內容物組成：

  • 陽極電解液（Anolyte）：100毫升，成分為0.08 M 磷酸（H?PO?），溶于0.1% 甲基纖維素（MC）溶液中

  • 陰極電解液（Catholyte）：100毫升，成分為0.1 M NaOH，溶于0.1% 甲基纖維素（MC）溶液中

• 適用儀器：iCE3全柱成像毛細管等電聚焦電泳儀、Maurice系列毛細管電泳系統(tǒng)（含Maurice C、Maurice、MauriceFlex）

• 適用卡盒：FC型cIEF卡盒（貨號101701）、HT型cIEF卡盒、cIEF 400卡盒（貨號PS-MC02-400C）、Maurice cIEF卡盒（貨號PS-MC02-C）

2.2 規(guī)格參數(shù)

參數(shù)項：詳細規(guī)格

每瓶體積：100毫升

套裝總量：200毫升（2×100毫升）

Anolyte濃度：0.08 M H?PO?

Catholyte濃度：0.1 M NaOH

甲基纖維素含量：0.1%（w/v）

包裝單位：2瓶/套

運輸條件：常溫運輸

儲存溫度：2-8°C 冷藏

保質期：詳見瓶身標簽

原產地：美國

安全標識：顏色編碼標簽

2.3 安全設計特性

本產品在生產設計中充分考慮了實驗室安全因素。兩瓶電解液的標簽和瓶身采用了顏色編碼識別系統(tǒng)，陽極電解液（Anolyte）和陰極電解液（Catholyte）以不同顏色進行明確區(qū)分，從而降低了實驗操作中誤加電解液的風險。這種顏色編碼設計對于繁忙的實驗室環(huán)境尤為重要，能夠有效避免因電解液混淆而導致的卡盒損壞或實驗結果異常。

三、產品核心特點

3.1 預配制即用型設計

iCE Electrolyte Kit采用了全預配制的設計理念。陽極電解液和陰極電解液的濃度均已精確配制至目標值（0.08 M H?PO? 和 0.1 M NaOH），并添加了0.1%的甲基纖維素作為粘度調節(jié)劑和電滲流抑制劑。用戶無需自行稱量、稀釋或配制，開瓶即用，顯著節(jié)省了實驗準備時間，同時消除了人工配制可能帶來的濃度誤差。

3.2 甲基纖維素協(xié)同配方

甲基纖維素（Methyl Cellulose, MC）是本試劑盒中的重要功能性添加劑。在icIEF分析中，甲基纖維素發(fā)揮著多重關鍵作用：

• 抑制電滲流（EOF）：甲基纖維素能夠在毛細管內壁形成一層物理屏障，減少毛細管壁對蛋白質樣品的吸附，同時將電滲流降至低水平。由于icIEF分離依賴于蛋白質在pH梯度中的靜電荷遷移，電滲流的存在會干擾聚焦過程，因此有效的EOF抑制是獲得高分辨率分離結果的必要條件。

• 提供粘度支撐：甲基纖維素增加了電解液的整體粘度，有助于維持毛細管內pH梯度的穩(wěn)定性，防止聚焦后的蛋白質區(qū)帶在分離過程中發(fā)生不必要的擴散。

• 保護毛細管涂層：對于FC型和HT型等涂覆毛細管卡盒而言，甲基纖維素的溫和性質有助于保護毛細管內壁的氟碳涂層不受破壞，延長卡盒的使用壽命。

3.3 寬幅pH梯度構筑能力

本試劑盒中的陽極電解液（酸性）和陰極電解液（堿性）構成了icIEF分析中pH梯度的基礎框架。在施加直流電壓后，陽極側的氫離子向陰極遷移，陰極側的氫氧根離子向陽極遷移，這一離子流與毛細管內的載體兩性電解質共同作用，在整個毛細管長度范圍內建立起連續(xù)的pH梯度。根據(jù)所選用的載體兩性電解質pH覆蓋范圍，該體系可以支持從pH 2.5到pH 10.5范圍內的蛋白質等電點測定。

3.4 高純度原料保障

Bio-Techne對所有試劑級化學品的采購和配制均執(zhí)行嚴格的質控標準。本試劑盒使用的磷酸和NaOH均為高純度級別，甲基纖維素也經(jīng)過嚴格的純化處理，確保其中不含可能干擾電泳分離過程的金屬離子雜質或其他污染物。這一品質保障措施對于獲得高重現(xiàn)性的icIEF數(shù)據(jù)至關重要。

3.5 與多系列卡盒的廣泛兼容性

iCE Electrolyte Kit經(jīng)過專門設計，可與ProteinSimple旗下多款cIEF卡盒配合使用：

• FC型cIEF卡盒（貨號101701）：這是ProteinSimple最早的cIEF卡盒產品，采用50毫米長、100微米內徑的氟碳涂層毛細管，內置電解液槽。使用時需要在樣品混合液中加入0.35%甲基纖維素，并在兩次運行之間用0.5%甲基纖維素沖洗卡盒。

• HT型cIEF卡盒：新一代卡盒產品，在保留FC卡盒基本結構的基礎上進行了多項改進，其中最重要的一點是樣品混合液中不再需要添加甲基纖維素，簡化了樣品制備流程。

• Maurice cIEF卡盒（貨號PS-MC02-C）：專為Maurice系列儀器設計的預組裝卡盒，每套包含2個卡盒，每個卡盒可進行最多200次進樣，最多20批運行。該卡盒同樣需要搭配本電解液試劑盒使用。

• icIEF 400卡盒（貨號PS-MC02-400C）：最新推出的高容量卡盒，單次卡盒可進行多達400次進樣和40批運行，大幅提升了高通量分析場景下的工作效率。

3.6 經(jīng)濟適用的包裝規(guī)格

以200毫升的總容量來看，iCE Electrolyte Kit的包裝規(guī)格充分考慮了實驗室的實際使用需求。在典型的icIEF分析條件下，每次運行消耗的電解液量較少，一套試劑盒可以支持數(shù)十至上百次實驗運行，具有較高的性價比。對于開展長期項目研究的實驗室而言，這種包裝規(guī)模既避免了頻繁補貨的不便，又不會造成試劑的長期積壓浪費。

四、儲存條件

4.1 推薦儲存溫度

iCE Electrolyte Kit應在2-8°C的冷藏環(huán)境下儲存。冷藏條件有助于維持甲基纖維素溶液的物理穩(wěn)定性，防止微生物生長和試劑降解。

4.2 避光儲存要求

建議將試劑盒存放于原包裝盒內，避免陽光直射或強光照射。雖然甲基纖維素溶液本身對光照相對穩(wěn)定，但長期暴露于紫外線下仍可能引起微量化學變化，因此避光儲存是最穩(wěn)妥的做法。

4.3 密封保存

每次使用后，務必將瓶蓋擰緊密封。甲基纖維素溶液在長期暴露于空氣中的情況下可能發(fā)生輕微的水分蒸發(fā)，導致濃度變化，進而影響實驗結果的重現(xiàn)性。良好的密封可以有效避免這一問題。

4.4 運輸與短期室溫存放

本產品在常溫下運輸。如果在實驗現(xiàn)場暫時無法冷藏，可以在室溫（15-25°C）下短期存放不超過48小時。超過此期限后，應盡快轉移至冷藏環(huán)境。

4.5 過期管理

每瓶電解液均標注有明確的有效期。過期產品不應繼續(xù)使用，因為甲基纖維素可能發(fā)生降解，磷酸和NaOH溶液也可能因吸收空氣中的二氧化碳而導致pH值漂移，從而影響icIEF分離效果。建議定期檢查庫存，遵循"先進先出"的使用原則。

4.6 冷凍禁忌

嚴禁將本產品冷凍儲存。 甲基纖維素溶液在凍結和解凍過程中可能發(fā)生不可逆的粘度變化，磷酸和NaOH溶液凍結后也會產生結晶析出，解凍后難以恢復均一狀態(tài)。一旦產品經(jīng)歷冷凍，應視為失效并廢棄處理。

五、工作原理

5.1 icIEF技術概述

要理解iCE Electrolyte Kit的作用原理，首先需要了解全柱成像毛細管等電聚焦（icIEF）技術的基本工作機制。icIEF是在傳統(tǒng)毛細管等電聚焦（cIEF）基礎上發(fā)展而來的一種革新性蛋白質分析技術。Bio-Techne于1999年推出了icIEF儀器iCE280，隨后在2012年升級為iCE3，并于2016年推出了集成更多功能的Maurice平臺。

icIEF技術的核心思想是：在毛細管內，利用外加直流電場驅動蛋白質分子依據(jù)其等電點（pI）進行分離和聚焦，并通過全柱成像的方式實時檢測整個分離過程，無需在聚焦完成后進行額外的移動（動員）步驟。

5.2 電解液在icIEF中的關鍵作用

本試劑盒中的陽極電解液（Anolyte，0.08 M H?PO?）和陰極電解液（Catholyte，0.1 M NaOH）構成了icIEF分析的"兩極"基礎，其具體作用機制如下：

（1）建立電場驅動力

icIEF卡盒的兩端各有一個電解液槽——一個靠近毛細管的陽端，另一個靠近陰端。陽極電解液槽連接正電極，陰極電解液槽連接負電極（接地）。當高壓電源啟動后，在毛細管兩端之間建立起強大的直流電場。這個電場是推動蛋白質分子和兩性電解質離子遷移的根本動力。

陽極電解液中的氫離子（H?）在電場作用下向陰極方向遷移，陰極電解液中的氫氧根離子（OH?）向陽極方向遷移。這些離子的定向遷移在毛細管內形成了動態(tài)的離子流，為pH梯度的建立奠定了基礎。

（2）構建pH梯度

pH梯度是icIEF分離的核心要素。在陽極電解液提供的酸性環(huán)境和陰極電解液提供的堿性環(huán)境的共同作用下，毛細管內預先注入的載體兩性電解質（Ampholytes）會根據(jù)自身的酸堿解離平衡，在整個毛細管長度范圍內自發(fā)排列成一個從低pH到高pH的連續(xù)梯度。

具體來說：

• 毛細管靠近陽極的一端，由于陽極電解液中氫離子的不斷涌入，pH值維持在較低水平（通常為2.5-3.0）

• 毛細管靠近陰極的一端，由于陰極電解液中氫氧根離子的持續(xù)供給，pH值維持在較高水平（通常為10.0-11.0）

• 介于兩端之間的毛細管中段，載體兩性電解質的不同組分"各就其位"，形成一條平滑的pH梯度曲線

（3）蛋白質聚焦分離

樣品蛋白質與載體兩性電解質混合后，被注入毛細管的全長范圍。在電場作用下，蛋白質分子會根據(jù)其在當前局部pH環(huán)境下的凈電荷情況發(fā)生遷移：

• 當?shù)鞍踪|所處位置的pH低于其等電點（pI）時，蛋白質帶正電荷，向陰極方向遷移

• 當?shù)鞍踪|所處位置的pH高于其等電點（pI）時，蛋白質帶負電荷，向陽極方向遷移

• 當?shù)鞍踪|遷移到pH恰好等于其pI的位置時，凈電荷為零，遷移停止，形成聚焦區(qū)帶

這一過程在毛細管內同步發(fā)生于所有蛋白質組分，使得不同的蛋白質異構體根據(jù)其pI值被精確地分離并聚焦于毛細管的不同位置。

（4）電流變化監(jiān)測

在icIEF運行過程中，通過監(jiān)測電流的變化可以判斷聚焦過程的進度。初始階段，毛細管內存在大量帶電離子，電流較高。隨著聚焦的進行，越來越多的蛋白質和兩性電解質分子達到電荷中性點，不再參與導電，電流逐漸下降。當電流降至低值并保持穩(wěn)定時，表明聚焦過程基本完成。

這一電流曲線的形態(tài)和終值也是評估icIEF系統(tǒng)工作狀態(tài)的重要診斷指標。

5.3 甲基纖維素的多重功能

本試劑盒中的0.1%甲基纖維素并非可有可無的"填料"，而是發(fā)揮著不可替代的功能性作用：

抑制電滲流（EOF）：未經(jīng)處理的熔融石英毛細管內壁帶有硅羥基（-Si-OH），在水溶液中會發(fā)生解離而帶上負電荷，從而產生指向陽極的電滲流。電滲流會將毛細管內的所有組分整體推向陰極，嚴重干擾icIEF的聚焦過程。甲基纖維素通過在毛細管內壁形成一層親水性的高分子膜，屏蔽了硅羥基的解離，將EOF降至可忽略的水平。

穩(wěn)定pH梯度：甲基纖維素增加了電解液的整體粘度，減緩了離子擴散速率，有助于維持毛細管內pH梯度的穩(wěn)定性，防止聚焦區(qū)帶在檢測前發(fā)生彌散。

保護毛細管涂層：對于采用氟碳涂層或其他特殊涂層的毛細管而言，甲基纖維素的溫和化學性質不會損傷涂層，同時提供了一定的緩沖保護作用。

5.4 icIEF與傳統(tǒng)cIEF的區(qū)別

理解本產品的工作原理，還需要認識icIEF相對于傳統(tǒng)cIEF的技術革新之處：

傳統(tǒng)cIEF在完成聚焦后，需要通過以下三種方式之一將聚焦后的蛋白質區(qū)帶移動經(jīng)過檢測器：

• 施加外部壓力推動毛細管內容物流動

• 利用毛細管自身的電滲流

• 進行化學動員（如更換陰極電解液為乙酸溶液）

這些動員步驟不僅增加了操作的復雜性，還會導致聚焦區(qū)帶的擴撒，降低分離分辨率。

而icIEF技術采用全柱成像檢測方式——在毛細管聚焦區(qū)域的側面，安裝了線性CCD相機，每隔一定時間（通常為30秒）對整個毛細管進行紫外吸收成像。這意味著從聚焦開始到結束的整個過程中，研究人員可以實時觀察蛋白質在毛細管內的遷移和聚焦行為，無需任何動員步驟。這不僅簡化了操作流程，更重要的是保留了聚焦區(qū)帶的銳利度，實現(xiàn)了更高的分辨率。

5.5 CE-SDS模式下的電解液作用

除了icIEF模式，iCE Electrolyte Kit也可用于Maurice系統(tǒng)的CE-SDS分析。在CE-SDS模式下，毛細管內填充有篩分基質（通常為聚乙烯氧化物等聚合物溶液），蛋白質樣品經(jīng)SDS變性處理后帶有一致的負電荷，在電場作用下依據(jù)分子大小進行分離。

雖然CE-SDS的分離機制與icIEF截然不同，但在某些Maurice儀器配置中，電解液槽仍然發(fā)揮著維持電場穩(wěn)定性和提供離子導電通路的作用。本試劑盒中的陽極和陰極電解液在CE-SDS模式下同樣扮演著的角色。

六、解決實驗中的實際問題

6.1 蛋白質電荷異質性表征難題

生物制藥領域中，單克隆抗體、融合蛋白、抗體偶聯(lián)藥物（ADC）等治療性蛋白往往存在電荷異質性問題。即使在看似均一的蛋白樣品中，也可能包含多種電荷變體，如脫酰胺產物（酸性變體）、C端賴氨酸剪切產物（堿性變體）、氧化產物、糖基化變體等。這些電荷變體的存在可能影響藥物的藥效、穩(wěn)定性、免疫原性和藥代動力學行為。

傳統(tǒng)的離子交換色譜（IEX）雖然也能分析電荷異質性，但在分辨率、分析速度和定量準確性方面存在局限。凝膠平板等電聚焦（IEF）的分辨率較高，但操作繁瑣、重現(xiàn)性差、難以準確定量，且無法進行自動化批量分析。

iCE Electrolyte Kit配合ProteinSimple的icIEF系統(tǒng)，為這一難題提供了高效的解決方案。該系統(tǒng)可以在10-15分鐘內完成一次高質量的電荷異質性分析，pI測定精度可達0.01 pH單位，峰面積相對標準偏差（RSD）通常低于1%，滿足生物制藥研發(fā)和質量控制的需求。

6.2 低豐度蛋白質檢測困難

在某些應用場景下，如早期藥物篩選階段或珍貴臨床樣本的分析中，可用的蛋白質樣品量極為有限。傳統(tǒng)分析方法往往需要數(shù)十到上百微升的樣品量，且檢測靈敏度不足，難以從復雜基質中檢出低豐度的靶標蛋白。

Maurice系統(tǒng)在icIEF模式下配備了自發(fā)熒光檢測通道（激發(fā)波長280 nm，發(fā)射波長320-450 nm），利用芳香族氨基酸（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸）的天然熒光特性進行檢測，無需額外的熒光標記。結合本電解液試劑盒提供的穩(wěn)定分析環(huán)境，Maurice可以將檢測下限降低至0.7 μg/mL，比傳統(tǒng)紫外吸收檢測靈敏度高出3-5倍。這意味著在樣品量極度受限的情況下，研究人員仍然能夠獲得可靠的定量數(shù)據(jù)。

6.3 方法開發(fā)和轉移的耗時問題

在生物制藥行業(yè)中，從藥物早期發(fā)現(xiàn)到臨床前研究，再到臨床試驗和商業(yè)化生產，分析方法需要在不同階段之間進行轉移和驗證。傳統(tǒng)icIEF分析的方法開發(fā)往往耗時數(shù)月，因為每個分子都需要針對其特定的pI范圍和兩性電解質組成進行逐一優(yōu)化。

ProteinSimple的icIEF平臺通過開發(fā)"通用方法"（Generic Method）概念，極大地縮短了方法開發(fā)周期。對于大多數(shù)單克隆抗體和ADC藥物，可以使用一套標準化的實驗條件——固定的兩性電解質pH范圍（如3-10）、固定的聚焦電壓和時間、以及本電解液試劑盒提供的標準電解液體系。這套通用方法可以在一天之內完成開發(fā)和驗證，使樣品分析速度比傳統(tǒng)技術快5-10倍。

6.4 批次間重現(xiàn)性不穩(wěn)定

在QC實驗室的日常工作中，批次間重現(xiàn)性是評估分析方法可靠性的核心指標。傳統(tǒng)手工操作的凝膠電泳方法，由于制膠、上樣、跑電泳、染色、脫色等步驟均存在人為操作變量，批次間重現(xiàn)性往往不盡如人意，給監(jiān)管機構的審查帶來困難。

iCE Electrolyte Kit配合ProteinSimple的預組裝卡盒和自動化進樣系統(tǒng)，從根本上消除了大部分人為操作變量。電解液的預配制特性確保了每次運行起始條件的高度一致性，卡盒的RFID芯片自動記錄使用次數(shù)和剩余壽命，系統(tǒng)軟件實時監(jiān)控聚焦電流曲線和基線穩(wěn)定性。這些因素共同保障了批次間重現(xiàn)性的優(yōu)異表現(xiàn)——在全球范圍內開展的跨實驗室比對研究中，不同站點的電荷變體峰面積標準差（RSD）均低于1.02%。

6.5 高鹽樣品干擾分離效果

許多生物制藥樣品來源于細胞培養(yǎng)液上清、發(fā)酵液或純化中間體，這些樣品中往往含有較高濃度的鹽離子（如NaCl、KCl、磷酸鹽等）。高鹽濃度在icIEF運行中會引發(fā)兩個主要問題：一是增加電泳電流，導致毛細管發(fā)熱和pH梯度壓縮；二是鹽離子可能與載體兩性電解質發(fā)生相互作用，干擾pH梯度的建立。

本電解液試劑盒中的甲基纖維素添加劑在一定程度上可以緩解高鹽樣品帶來的影響，但更為根本的解決方案是在樣品制備階段進行脫鹽處理。ProteinSimple推薦在使用本電解液試劑盒進行分析前，對高濃度鹽樣品進行離心超濾濃縮和緩沖液置換，或使用低電導率的稀釋液將樣品稀釋至適宜的電導率范圍。

6.6 卡盒壽命管理和成本控制

毛細管卡盒是icIEF分析中的主要消耗品，其使用壽命直接影響實驗室的運行成本。在實際使用中，卡盒壽命的損耗往往與電解液的質量和操作規(guī)范性密切相關。

iCE Electrolyte Kit通過以下方式幫助延長卡盒壽命：

• 預配制的電解液濃度精確匹配卡盒的設計參數(shù)，避免因濃度不當導致的毛細管涂層損傷

• 甲基纖維素的保護作用減少了樣品中雜質對毛細管壁的吸附

• 顏色編碼的瓶身設計降低了誤操作風險，避免因加錯電解液而引發(fā)的卡盒損壞

• 規(guī)范的儲存條件確保了電解液的長期穩(wěn)定性，避免因試劑變質導致的異常電流升高

6.7 合規(guī)性挑戰(zhàn)

對于在GMP環(huán)境下運行的生物制藥QC實驗室而言，分析儀器和試劑必須符合嚴格的監(jiān)管要求，包括數(shù)據(jù)完整性、審計追蹤、電子簽名等方面。傳統(tǒng)電泳方法缺乏自動化的數(shù)據(jù)記錄和管理功能，難以滿足21 CFR Part 11等法規(guī)要求。

ProteinSimple的Compass for iCE軟件與Maurice系統(tǒng)配合使用，全面支持21 CFR Part 11合規(guī)要求，包括用戶權限管理、審計追蹤、電子簽名和數(shù)據(jù)加密等功能。iCE Electrolyte Kit作為該分析流程中的關鍵試劑，其批次信息和有效期管理也可以在軟件系統(tǒng)中進行電子化記錄和追溯，為實驗室的合規(guī)性建設提供支持。

七、使用方法

7.1 使用前的準備工作

在開始icIEF分析之前，請確保完成以下準備工作：

（1）檢查試劑盒狀態(tài)

打開試劑盒包裝，仔細檢查兩瓶電解液的外觀。正常的Anolyte（陽極電解液）應為澄清無色透明液體，Catholyte（陰極電解液）應為澄清無色至淡黃色透明液體。如果發(fā)現(xiàn)溶液出現(xiàn)渾濁、沉淀、變色或有異味，請勿使用，并聯(lián)系供應商進行更換。

檢查瓶身上的有效期標簽，確認試劑盒在有效期內。如果已超過有效期，請勿使用。

（2）平衡至室溫

從冷藏環(huán)境中取出電解液瓶后，建議在室溫下靜置約30分鐘，使溶液溫度回升至室溫。溫度過低可能導致溶液粘度偏高，影響加樣操作的流暢性。

（3）準備配套試劑

除本電解液試劑盒外，icIEF分析還需要以下配套試劑：

• 載體兩性電解質（Ampholytes），pH范圍根據(jù)待測樣品的pI范圍選擇

• pI標記物（pI Markers），用于校準pH梯度

• 甲基纖維素溶液（0.5%或1%，視卡盒類型而定）

• 尿素溶液（8M，用于提高蛋白溶解度）

• 封閉劑（如亞氨基二乙酸，IDA，pI 2.2；或精氨酸，pI 10.7）

7.2 電解液加注步驟

（1）識別電解液槽

Maurice cIEF卡盒和iCE3 FC/HT卡盒的兩端各設有一個電解液槽。請以顏色編碼為指引：

• 紅色端口（Red Port）：對應陰極電解液槽（Catholyte，0.1 M NaOH），用于加入本試劑盒中的Catholyte溶液

• 白色端口（White Port）：對應陽極電解液槽（Anolyte，0.08 M H?PO?），用于加入本試劑盒中的Anolyte溶液

（2）加注Catholyte（陰極電解液）

取下Catholyte瓶的瓶蓋，使用移液器吸取適量Catholyte溶液。將移液器吸頭伸入卡盒的紅色端口電解液槽內，緩慢注入溶液。注意不要讓溶液溢出電解液槽。通常電解液槽的容量為數(shù)百微升至數(shù)毫升不等，具體加注量請參照所用卡盒的說明書。

（3）加注Anolyte（陽極電解液）

同理，取下Anolyte瓶的瓶蓋，使用移液器吸取適量Anolyte溶液，注入卡盒的白色端口電解液槽內。

（4）檢查加注情況

加注完成后，檢查兩個電解液槽的液面高度是否基本一致。如果液面明顯不平衡，可能會影響電場分布的均勻性。

7.3 樣品制備

icIEF樣品的制備是獲得高質量分析結果的關鍵環(huán)節(jié)。以下為通用樣品制備流程：

（1）確定樣品濃度

將待測蛋白質樣品用純水稀釋至目標濃度。對于大多數(shù)單克隆抗體，推薦的初始濃度為1-2 mg/mL。對于低豐度樣品，可以適當提高濃度；對于高濃度樣品，則需適當稀釋以避免過載。

（2）配制Master Mix（主混合液）

在一個干凈的微量離心管中，按以下比例配制Master Mix（以單份樣品為例）：

• 8M尿素溶液：50 μL

• 載體兩性電解質（如3-10 pH范圍）：8 μL

• 1%甲基纖維素溶液：70 μL

• 純水：30 μL

• 酸性pI標記物（如pI 5.12）：1 μL

• 堿性pI標記物（如pI 9.50）：1 μL

輕柔混勻Master Mix，注意不要產生過多氣泡。

（3）樣品與Master Mix混合

取40 μL待測蛋白樣品（濃度為2 mg/mL）加入160 μL Master Mix中，總體積為200 μL。輕柔顛倒混勻數(shù)次，然后以約15,000 × g的離心力離心15秒，使樣品沉降至管底。

（4）轉移至進樣瓶

將制備好的樣品轉移至專用的icIEF進樣瓶中。如果使用iCE3系統(tǒng)，需使用Alcott 720自動進樣器的專用樣品瓶；如果使用Maurice系統(tǒng)，則使用2 mL玻璃試劑瓶（貨號046-017）。

蓋上瓶蓋前，檢查樣品中是否有氣泡。氣泡的存在會影響進樣的準確性，如有氣泡可用移液器小心移除。

7.4 儀器運行

（1）安裝卡盒

將已加注電解液的cIEF卡盒插入Maurice或iCE3儀器的卡盒插槽中。確保卡盒全就位，卡扣鎖定。

（2）裝載樣品

將裝有制備好樣品的進樣瓶放入自動進樣器的指定位置。如果使用96孔板，則將樣品板正確放置于樣品托盤上。

（3）設置運行參數(shù)

在Compass for iCE軟件中，根據(jù)待測樣品的特性設置運行參數(shù)。通用的icIEF運行參數(shù)如下：

• 預聚焦電壓：1,500 V，持續(xù)時間1分鐘

• 聚焦電壓：3,000 V，持續(xù)時間取決于樣品（通常6-15分鐘）

• 檢測波長：280 nm（紫外吸收）和/或自發(fā)熒光模式

• 自動進樣器溫度：8 ± 2°C

（4）啟動運行

點擊軟件界面上的"Start"按鈕，儀器將自動完成以下流程：

• 毛細管清洗和平衡

• 自動進樣

• 施加聚焦電壓

• 實時成像采集

• 數(shù)據(jù)分析處理

• 自動清洗卡盒

整個運行過程結束后，系統(tǒng)會自動通知用戶。

7.5 運行后處理

（1）卡盒清洗

Maurice系統(tǒng)在每次運行結束后會自動清洗cIEF卡盒。但如果需要在24小時內再次使用同一卡盒，可以留在儀器內；如果超過24小時不使用，則需要按照卡盒說明書的步驟進行手動清洗和儲存。

（2）電解液槽清潔

定期（建議每20-40次運行后）清潔電解液槽。使用純水沖洗電解液槽，然后用無塵紙或棉簽擦干。注意不要使用有機溶劑清洗電解液槽，以免損壞卡盒材料。

（3）剩余電解液的處理

如果電解液瓶中還有剩余液體，應重新密封瓶蓋，放回2-8°C冷藏環(huán)境保存。建議在瓶身上標注開封日期，以便跟蹤使用期限。

八、常見問題與解決方案

8.1 電流異常升高

問題描述：在icIEF運行過程中，聚焦電流明顯高于正常值（正常終值通常低于10 μA），且在預期時間內未降至穩(wěn)定水平。

可能原因：

• 樣品中含有過高濃度的鹽離子

• 電解液濃度配制錯誤

• 卡盒毛細管涂層受損

• 電解液槽中混入雜質

解決方案：

• 對高鹽樣品進行脫鹽處理后再進行分析

• 檢查電解液的配制濃度是否正確，必要時重新配制

• 檢查卡盒狀態(tài)，如果涂層受損，考慮更換卡盒

• 清潔電解液槽，并用純水沖洗

8.2 分離分辨率下降

問題描述：蛋白質峰形變寬、相鄰的電荷變體無法有效分離，pI測定精度下降。

可能原因：

• pH梯度建立不充分或不穩(wěn)定

• 甲基纖維素濃度不足或失效

• 載體兩性電解質pH范圍選擇不當

• 聚焦時間不足

解決方案：

• 確認電解液濃度正確，特別是甲基纖維素的含量

• 檢查載體兩性電解質的pH覆蓋范圍是否覆蓋了待測樣品的pI范圍

• 適當延長聚焦時間，觀察電流曲線是否已降至穩(wěn)定平臺

• 如果甲基纖維素溶液儲存時間過長，考慮更換新鮮溶液

8.3 基線噪聲增大

問題描述：在電泳圖中出現(xiàn)不規(guī)則的尖峰或基線波動，影響數(shù)據(jù)的準確性和重現(xiàn)性。

可能原因：

• 卡盒光學窗口表面有污漬或液滴

• 樣品中存在不溶性顆粒

• 毛細管內壁吸附了雜質

• 電解液受到污染

解決方案：

• 使用無塵壓縮空氣清潔卡盒光學窗口表面，噴嘴距離10-12英寸，以溫和氣流掃過整個光學窗口區(qū)域

• 在樣品制備后對樣品進行離心處理（如15,000 × g，5分鐘），去除不溶性顆粒

• 運行卡盒清洗程序，清除毛細管內壁的吸附雜質

• 更換受污染的電解液

8.4 聚焦時間過長

問題描述：電流在較長時間內未能降至穩(wěn)定水平，聚焦過程超過預期時間。

可能原因：

• 樣品濃度過高，導致過多的帶電離子參與導電

• 電解液濃度偏低

• 毛細管內壁涂層老化，電滲流增大

• 環(huán)境溫度波動較大

解決方案：

• 適當稀釋樣品濃度

• 檢查電解液濃度是否達標，必要時更換電解液

• 評估卡盒的使用次數(shù)，考慮更換新卡盒

• 確保儀器工作環(huán)境溫度穩(wěn)定

8.5 pI標記物峰形異常

問題描述：電泳圖中的pI標記物峰形異常（如峰形不對稱、峰面積異常偏大或偏小），影響pH梯度的校準。

可能原因：

• pI標記物儲存不當或已過期

• pI標記物濃度不正確

• 電解液pH值與pI標記物不匹配

• 進樣量不一致

解決方案：

• 檢查pI標記物的有效期，過期標記物應更換

• 確認pI標記物的配制濃度符合方法要求

• 選擇與pI標記物匹配的兩性電解質pH范圍

• 確保每次進樣的樣品體積一致

8.6 卡盒報錯提示電解液錯誤

問題描述：儀器顯示錯誤信息，提示電解液加注不正確或電解液槽為空。

可能原因：

• 電解液加注不足

• 電解液加注到了錯誤的端口（如將Anolyte加入了紅色端口）

• 電解液槽泄漏

• 卡盒液位傳感器故障

解決方案：

• 檢查兩個電解液槽的液面高度，確保都已加注滿

• 核對電解液的加注端口是否正確：紅色端口→Catholyte，白色端口→Anolyte

• 檢查電解液槽是否有裂紋或泄漏

• 重啟儀器并重新加注電解液后再次嘗試

8.7 重現(xiàn)性差

問題描述：同一樣品在不同時間運行得到的結果差異較大，峰面積RSD超過可接受范圍。

可能原因：

• 電解液批次間差異

• 樣品制備過程不規(guī)范

• 卡盒狀態(tài)不一致

• 環(huán)境條件（溫度、濕度）波動

• 儀器參數(shù)設置不一致

解決方案：

• 使用同一批次的電解液進行對比實驗

• 制定詳細的SOP并嚴格執(zhí)行，確保每次樣品制備的條件一致

• 記錄每次運行時卡盒的使用次數(shù)，評估卡盒狀態(tài)對結果的影響

• 控制實驗室環(huán)境條件，必要時使用溫濕度監(jiān)控系統(tǒng)

• 建立系統(tǒng)適用性測試（SST）程序，每次運行前用標準品驗證系統(tǒng)狀態(tài)

8.8 電解液結塊或沉淀

問題描述：電解液瓶中出現(xiàn)可見的晶體或沉淀物。

可能原因：

• 電解液經(jīng)歷了冷凍和解凍循環(huán)

• 儲存溫度過高加速試劑分解

• 瓶蓋密封不嚴導致水分蒸發(fā)和CO?吸收

解決方案：

• 如果發(fā)現(xiàn)電解液有結塊或沉淀，請勿使用，立即更換新瓶

• 確保電解液始終儲存在2-8°C的冷藏環(huán)境中

• 每次使用后務必擰緊瓶蓋，保持良好的密封狀態(tài)

8.9 系統(tǒng)無法檢測到信號

問題描述：運行結束后，電泳圖中幾乎沒有信號峰，或信號強度遠低于預期。

可能原因：

• 樣品濃度過低

• 進樣失敗

• 毛細管堵塞

• 檢測波長設置錯誤

• 電解液濃度異常導致電場建立失敗

解決方案：

• 提高樣品濃度或增加進樣體積

• 檢查進樣針和管路是否正常，必要時進行清洗

• 運行卡盒清洗程序，清除毛細管堵塞

• 確認檢測波長設置為280 nm（紫外吸收）或啟用自發(fā)熒光檢測模式

• 檢查電解液濃度和加注情況

8.10 卡盒壽命提前耗盡

問題描述：卡盒在遠未達到標稱使用次數(shù)時即出現(xiàn)故障或性能明顯下降。

可能原因：

• 電解液濃度不當導致毛細管涂層受損

• 樣品中含有對毛細管有害的成分（如高鹽、有機溶劑、芳香族表面活性劑等）

• 卡盒清潔不充分

• 頻繁的溫度循環(huán)導致毛細管老化

解決方案：

• 嚴格控制電解液的濃度和配制質量

• 避免使用有機溶劑和高濃度鹽離子樣品

• 每次運行后執(zhí)行完整的卡盒清洗程序

• 避免卡盒經(jīng)歷頻繁的溫度變化，盡量在恒溫環(huán)境下操作

九、安全注意事項

9.1 化學品安全

本試劑盒中的電解液含有腐蝕性化學品：

• 陽極電解液（0.08 M H?PO?）：磷酸為中等強度的無機酸，對皮膚和眼睛有刺激性。操作時請佩戴適當?shù)膫€人防護裝備，包括防護眼鏡、手套和實驗服。如不慎接觸皮膚或眼睛，應立即用大量清水沖洗至少15分鐘，并及時就醫(yī)。

• 陰極電解液（0.1 M NaOH）：NaOH為強堿，具有強腐蝕性。操作時應格外小心，避免接觸皮膚和眼睛。如發(fā)生接觸，處理方法同上。

9.2 廢液處理

使用后的電解液和含電解液的廢液應按照實驗室危險化學品廢棄物處理規(guī)程進行處置。不得隨意傾倒至下水道。建議將廢液收集于專用的廢液容器中，交由具有資質的危險廢物處理機構進行處置。

9.3 應急處理

實驗室應配備緊急洗眼器和沖淋裝置，以便在發(fā)生意外接觸時立即進行處理。建議在操作區(qū)域附近張貼化學品安全技術說明書（SDS）的摘要信息，以便在緊急情況下快速查閱。

十、訂購信息

如需訂購iCE Electrolyte Kit（貨號102506）或查詢相關信息，可聯(lián)系Bio-Techne ProteinSimple在中國的經(jīng)銷商（上海起發(fā)實驗試劑有限公司）。訂貨時請注明貨號102506，并確認所需的數(shù)量和交貨時間。

建議實驗室根據(jù)日常使用頻率和庫存周轉率，制定合理的訂購計劃，確保分析工作的連續(xù)性。對于用量較大的QC實驗室，可以考慮批量采購以獲得更好的優(yōu)惠。

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（注：本文內容基于品牌公開資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）

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